Análisis avanzado del ciclo celular

El uso de la citometría de flujo para el seguimiento del ciclo celular es un método rápido para estudiar los atributos de las poblaciones celulares. Los métodos comúnmente aplicados se basan en el análisis univariante del contenido de ADN celular tras la tinción con colorantes fluorescentes de unión al ADN. Entre los colorantes, el yoduro de propidio y el DAPI se utilizan comúnmente por su capacidad de unirse cuantitativamente al ADN; por lo tanto, la medición de su intensidad de fluorescencia permite la resolución de las 3 fases principales del ciclo celular, G0/G1, S y G2/M, que difieren entre sí por su contenido de ADN. Dado que las células de las fases G2 y M tienen el mismo contenido de ADN, el enfoque univariante no permite su separación. Para este tipo de análisis, un enfoque más informativo consiste en un procedimiento bivariante que utilice la medición tanto del contenido de ADN como de la expresión de las proteínas asociadas a las diversas fases del ciclo celular utilizando anticuerpos marcados con fluorescencia. Entre otras, las ciclinas, que tienen un tiempo de expresión discontinuo a lo largo del ciclo, y la histona H3, que se fosforila diferencialmente entre la mitosis y el G2, constituyen objetivos adecuados para identificar con mayor nivel de detalles las diversas fases del ciclo celular. La combinación de las mediciones de ADN y proteínas proporciona el medio para separar las células en G2 y en diferentes fases M.

Ciclo celular avanzado utilizando el análisis multivariante de la línea celular Jurkat. Las células Jurkat no tratadas se tiñeron con anti-fosfo-histona H3-Alexa647, ciclina A2-FITC y el kit de ciclo celular. (A) La visualización de G1, S y G2, de acuerdo con el análisis bivariante de tinción del ADN (B) utilizando tinción de ADN y tinción de pH3, muestra separación entre los análisis duales de las fases G1, S, G2 y M (C) de pH3, y la expresión de ciclina A2 proporciona los medios para distinguir las células en la fase M. (D) El trazado se selecciona en G2/M, que se define mediante la ventana de selección booleana que comprende las células en las ventanas de selección III y IV de la Figura B. La ciclina A2 por pH3 permite la separación de las células en G2, profase, metafase/anafase y mitosis tardía.