• Extracción y purificación de ARN de alta calidad total a partir de células cultivadas en un formato de 96 pocillos.
  • Extracción eficiente del ADN genómico y otras sustancias contaminantes
  • Sin centrifugación ni filtración al vacío
  • Ideal para las aplicaciones de expresión génica
  • Admite el procesamiento manual y métodos de automatización completa en las estaciones de trabajo de automatización de laboratorio Biomek NXP y FXP.
  • Producción: Dos placas de 96 pocillos en aproximadamente dos horas y 15 minutos en el Biomek FXP

Aplicación: Extracción de ARN de células cultivadas

Técnicas de aplicación posteriores: qRT-PCR, análisis de micromatriz

Descripción general del proceso

1. Comience con células cultivadas o células primarias. 2. Someta a lisis las células cultivadas con la solución amortiguadora de lisis y proteinasa K, y transfiera a una nueva placa. 3. Una el ARN total a las esferas paramagnéticas. 4. Separe las esferas de las sustancias contaminantes, lave con la solución amortiguadora y etanol. 5. Agregue DNasa para digerir el ADN genómico. 6. Vuelva a unir el ARN a las esferas con la solución amortiguadora y elimine las sustancias contaminantes. 7. Lave las esferas magnéticas con etanol 70 % para eliminar los contaminantes residuales. 8. Eluya el ADN de las partículas magnéticas.

Alta recuperación de ácido nucleico

El método de extracción de Agencourt RNAdvance Cell v2 produjo sistemáticamente una recuperación de ARN total más alta en comparación con los métodos de la competencia RNeasy* y MagneSil* usando la misma cantidad de células (Figura 1).

Figura 1. Se aisló el ARN total de células 5x104 HeLa usando el sistema Agencourt RNAdvance Cell v2, el kit RNeasy o el kit MagneSil. La cuantificación se realizó mediante el ensayo RiboGreen*. Agencourt RNAdvance Cell v2 produjo sistemáticamente un mayor rendimiento que los competidores RNeasy y MagneSil.

Purificación de ARN de calidad

El sistema Agencourt RNAdvance Cell v2 se comparó con los kits RNeasy y MagneSil en relación con la calidad del ARN total. Los análisis de las muestras usando el bioanalizador Agilent* 2100 demostraron que el ARN aislado con Agencourt RNAdvance Cell v2 logró puntajes de número de integridad de ARN (RNA Integrity Number, RIN) sistemáticamente superiores que las tecnologías de la competencia (Figura 2). Para obtener más información sobre los puntajes de calidad de ARN RIN, consulte Genomics and Proteomics v.4; n.° 5, pp. 14-21.

Figura 2. Las muestras de ARN se aislaron usando el nanochip de ARN del bioanalizador Agilent 2100. El ARN total se extrajo de células 5 x 104 HeLa usando (A) Agencourt RNAdvance Cell v2, (B) RNeasy o (C) MagneSil (protocolos estándar). Número de integridad de ARN (RIN) promedio según se determinó con el bioanalizador Agilent 2100 (cinco replicaciones de extracción realizadas en células 5 x 104 HeLa para cada kit).

Resumen

Agencourt RNAdvance Cell v2 es un método simple y altamente eficiente para aislar y purificar el ARN total de las células cultivadas. Su rendimiento superior proporciona ARN de alta calidad para usar en aplicaciones de micromatriz o expresión génica PCR en tiempo real. La tecnología basada en esferas paramagnéticas de Agencourt SPRI, con su flexibilidad de adaptarse a formatos manuales o completamente automatizados para placas de 96 pocillos, permite la extracción eficiente de sustancias contaminantes sin necesidad de filtración o centrifugación. Agencourt RNAdvance Cell v2 produce una alta recuperación, mejor calidad y resultados más constantes en comparación con otras tecnologías de aislamiento y purificación de ARN con una solución de automatización simple.