Datos de muestra de DRAQ7

DRAQ7 tiene muchas aplicaciones y es altamente compatible con los protocolos existentes en una amplia gama de plataformas instrumentales.

  • Tinción rápida de ADNbc/núcleos de células muertas o permeabilizadas
  • Combinación con colorantes de células vivas para discriminación muerta/viva
  • Fácil de usar: no requiere lavado ni RNasa
  • Ideal para su uso con etiquetas GFP y FITC: DRAQ7 emite fluorescencia en la región rojo lejano
  • DRAQ7 es una contratinción de ADN en rojo lejano ideal para IF/IHC, discriminación de alto contenido y ensayos basados en células

Características espectrales:

  • Emisión de fluorescencia de 665 nm en el infrarrojo bajo
  • Entre los filtros de emisión óptimos sugeridos se incluyen el 695LP, 715LP o 780 LP
  • Es ópticamente compatible con los citómetros de flujo y de escaneo láser de sobremesa y los microscopios confocales epifluorescentes y no UV
  • Excitación útil a longitudes de onda subóptimas de las líneas de 488 nm, 568 nm y 633 nm, además de excitación óptima de 647 nm. Sin excitación UV, a diferencia de yoduro de propidio.
  • No se necesita compensación con las combinaciones comunes de FITC/GFP + PE en citometría de flujo. Se puede combinar con muchos colorantes de células vivas.
  • Permite la obtención de imágenes/citometría de múltiples líneas cuando se combina con fluorocromos de los intervalos UV y visible
  • Sin mejora aparente de la fluorescencia tras la unión con el ADN
  • No se observa normalmente fotoblanqueo

Perfil espectral:

Los siguientes gráficos muestran los espectros de emisión de fluorescencia y absorbancia estándar del DRAQ7 en solución acuosa para un intervalo de diferentes longitudes de onda de excitación. Como puede verse, DRAQ7 puede excitarse de forma eficaz mediante sistemas de 488 nm. En estas circunstancias, recomendamos utilizar un filtro de paso de banda larga para capturar tantos fotones emitidos como sea posible.

Excitación:

  • Líneas de 633 y 647 nm, óptimas (Exλmax 599/644 nm)
  • Líneas de 488, 514 y 568 nm, subóptimas (solo mediante citometría de flujo)

Emisión:

  • >665 nm a infrarrojo >800 nm (Emλmax 678 nm/694 nm intercalado con ADNbc)
  • Solapamiento mínimo con el intervalo visible, p. ej., GFP y FITC
  • Los filtros de emisión pueden incluir el 695LP, 715LP, 725 BP 20 o 780 LP

El DRAQ7 penetra y etiqueta solo las células con membrana comprometida.

Los datos citométricos de flujo que aparecen a continuación muestran la apoptosis (membranas comprometidas que permiten la entrada de DRAQ7) de las células Jurkat humanas expuestas a 0,1 - 2,0 µM de estaurosporina durante 24h en comparación con los controles negativos.

El DRAQ7 se puede utilizar en el análisis citométrico de flujo para marcar las células con membrana comprometida, en combinación con reactivos como la anexina V, sondas de membrana mitocondrial y otros informantes de salud celular. Los colorantes de ADN no permeables a células intactas y vivas se combinan comúnmente con la anexina V (que informa de la inversión de la membrana) para proporcionar información sobre la progresión de la apoptosis. Como se muestra en la figura a continuación, el DRAQ7 (series superior e intermedia) funciona de manera equivalente al yoduro de propidio (PI, serie inferior), para informar sobre el inicio de la fugacidad de la membrana causada por el aumento de las dosis de VP-16. Además, el DRAQ7 ofrece nuevas posibilidades como colorante de unión de ADN en rojo lejano. Mediante el uso de visualizaciones logarítmicas y lineales, se pueden identificar más subpoblaciones discretas. Además, a diferencia del PI, el DRAQ7 permite medir varios parámetros fluorescentes en paralelo; 4 con excitación de láser azul.

El DRAQ7 se puede utilizar en ensayos de apoptosis, ensayos de citotoxicidad, pruebas de anticuerpos citolíticos y ensayos de salud celular.

Debido a su señal de emisión en rojo lejano, el DRAQ7 se puede combinar fácilmente con otros fluoróforos; hasta 4 con una única fuente de excitación de 488 nm (láser de iones de argón).